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¿Cómo se realiza la prueba diagnóstica PCR en tiempo real para detección de COVID-19?

Actualmente existen 3 diferentes tipos de pruebas para la detección de SARS-CoV-2 (COVID-19), sin embargo, cada una tiene sus particularidades, existen tres diferentes tipos de pruebas.

  • Prueba de diagnóstico molecular mediante PCR en tiempo real
  • Prueba rápida basada en la detección de antígeno y
  • Prueba rápida basada en la detección de anticuerpos

Sin embargo, solo la prueba de diagnóstico molecular mediante PCR, es considerada actualmente a nivel nacional e internacional como único método diagnóstico de COVID-19.

Pasos para realizar la prueba COVID-19 en PCR en tiempo real

  1. El primer paso, es una adecuada toma de muestra, la cual debe ser realizada por personal capacitado, designado por el laboratorio y con el equipo de protección necesario, ya que cada muestra tomada debe ser considerada como potencialmente infecciosa.

La recolección de la muestra, es de exudado faríngeo y nasofaríngeo, mediante un hisopo estéril se frota con firmeza tanto la pared posterior de la garganta (orofaringe), como la pared de la nasofaringe, al cual se llega a través de una fosa nasal, esto con la finalidad de obtener células que probablemente estén infectadas por el virus. Por lo que, el éxito del diagnóstico virológico depende principalmente de la calidad de la muestra.

  1. Cada muestra es colocada en un tubo especial con medio de transporte viral, debidamente identificado con el nombre completo del paciente, es transportado a temperatura de entre 2° a 8°C hasta llegar al laboratorio donde se procesará la muestra.
  2. Se conoce que el SARS-CoV-2 es un nuevo tipo de coronavirus, los cuales son virus de ARN (ácido ribonucleico), por lo que el primer paso es la extracción de este ARN de cadena sencilla de la muestra y posterior conversión a ADN de doble cadena (ácido desoxirribonucleico) mediante una enzima denominada transcriptasa reversa.

Está descrita la secuencia genómica del virus SARS-CoV-2, por lo que se diseñaron unas sondas o cebadores las cuales son regiones cortas con secuencias específicas de ADN de este virus diseñadas para unirse al virus que además tienen colorantes fluorescentes, estas secuencias específicas son 3 genes: gen RdRp, gen E y gen N.

  1. Cuantas más copias del ADN del virus se producen, mayor es la fluorescencia. Si la fluorescencia supera un cierto umbral la prueba para detección de COVID-19 es positiva.
    Si no hay virus, no hay copias de ADN viral y por lo tanto no se pasa el umbral, por lo que el resultado de la prueba es negativa

 

Técnica PCR en tiempo real para prueba COVID-19

El procesamiento de la muestra es mediante una técnica de biología molecular denominada reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) también considerada como una PCR cuantitativa.

Esta técnica de PCR (RT-PCR) en tiempo real se realiza en un aparato denominado termociclador, el cual tiene la capacidad de aumentar y disminuir la temperatura rápidamente de forma repetida en varias ocasiones y cada vez que lo hace se le conoce como un ciclo.

Son 3 los pasos básicos de una PCR en tiempo real:

  • El primero es la “desnaturalización” que permite la separación de los ácidos nucleicos de la muestra.
  • El segundo es la “hibridación” en la cual se van a alinear secuencias genómicas complementarias, que en este caso sería las sondas de los 3 genes RdRp, N y E con la secuencia del virus SARS-CoV-2 en la muestra a analizar. Si es que en la muestra analizada existen secuencias de este virus, y se complementa, cada vez que se unan se emitirá una señal fluorescente.
  • Finalmente el tercer paso es la “extensión” que permite se hagan millones de copias de estas regiones víricas en particular, este proceso tarda aproximadamente 8 horas.

Life in Genomics ofrece la prueba para detectar COVID-19 en PCR en tiempo real, los resultados se entregan en un tiempo de 48 a 96 horas. Sabemos de la importancia de un diagnóstico oportuno por lo que trabajamos continuamente para que el tiempo de entrega de resultados sea en el menor tiempo posible, sin embargo, ante la situación que vivimos actualmente la demanda sigue en aumento.

Si estás interesado en realizar la prueba COVID-19 podemos darte la información que requieres, contáctanos por llamada a los teléfonos 55 5240 1500 y 55 5240 1501 o por WhatsApp al 55 2314 0389.

También contamos con precio especial y toma de muestra a domicilio para empresas.

Bibliografía

– Lineamiento estandarizado para la vigilancia epidemiológica y por laboratorio de la enfermedad respiratoria viral. Abril de 2020. Gobierno de México. Secretaria de Salud. Dirección General de Epidemiología.
– GeneFinder™ COVID-19 PLUS RealAmp Kit
– Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR. Corman VM et al. Euro Surveill. 2020 Jan;25(3).
– https://www.who.int
– Implementación del RT-PCR en tiempo real para el diagnóstico de COVID-19. Protocolo transferido por el InDRE. Secretaria de Salud. Dirección general de Epidemiología. Instituto de Diagnóstico y referencia Epidemiológica.

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